大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

作者：张潇骏; 王万能; 周继红; 刘钦; 顾仕苓; 周代君; 邱俊; 代维; 袁丹凤; 刘大维

来源：动物医学进展, 2016, 37(04): 18-23.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2016.04.004

• 肺表面活性蛋白B
• 原核表达
• 免疫印迹
• 蛋白纯化
• 大鼠

为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。

• 单位
  生物工程学院; 重庆理工大学