以重组融合蛋白为基础的钩端螺旋体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的初步研制

作者：胡玉山; 刘巧谊; 肖丽红; 周勇; 侯水平; 刘俊华

来源：实用预防医学, 2019, 26(07): 808-811.

• 钩端螺旋体
• 融合蛋白LipL32-LipL41
• ELISA

目的建立以钩端螺旋体融合蛋白LipL32-LipL41(LipL32:脂蛋白L32,lipoprotein32;LipL41:脂蛋白L41,lipoprotein41)为包被抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂。方法选择问号钩端螺旋体LipL32和LipL41作为研究靶标,采用连接引物PCR法构建lipL32-lipL41融合基因,原核表达获得重组蛋白,以该蛋白为包被抗原建立ELISA检测体系,对检测体系的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标进行评价。结果扩增获得了1 900 bp左右的lipL32-lipL41融合基因,原核表达出了90 kDa左右的重组融合蛋白LipL32-LipL41,建立了基于LipL32-LipL41的ELISA检测体系,采用77例确诊病例和85例阴性对照血清进行初步验证,检测体系的灵敏度为96.1%,特异度为97.6%,粗一致性为96.9%,约登指数为0.937。结论以LipL32-LipL41重组融合蛋白为包被抗原建立ELISA免疫检测初步验证的灵敏度、特异性和稳定性较好,可进行下一步验证工作。

• 单位
  广州市疾病预防控制中心