pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒的构建及在肝癌细胞系HepG2中稳定高表达

作者：徐珩; 杨硕; 顾娜; 冯丹丹; 闾军; 汪思应

来源：安徽医科大学学报, 2010, 45(05): 621-625.

DOI：10.3969/j.issn.1000-1492.2010.05.008

• 癌,肝细胞
• 转染
• 免疫疗法
• 荧光免疫测定

目的建立癌-睾丸抗原NY-ESO-1稳定表达的HepG2肝癌细胞系。方法设计NY-ESO-1的引物,PCR法从NY-ESO-1阳性表达的睾丸癌组织中扩增出目的片段,克隆至T载体,双酶切后定向连入pCDNA3.1载体,构建pCD-NA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒。经酶切、PCR、测序检测其构建的正确性,脂质体转染法将重组质粒转入HepG2细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞系,RT-PCR法、间接免疫荧光法分别检测稳定转染HepG2细胞中NY-ESO-1基因、蛋白的表达水平。结果构建的pCDNA3.1/NY-ESO-1质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞。结论构建了pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒及稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞株,为下一步以NY-ESO-1为靶标进行肝癌的抗原特异性免疫治疗研究奠定了实验基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院; 安徽医科大学