环状RNA hsa＿circ＿0091579对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：于维凯; 冯婷婷; 陈晓兵; 骆继业; 冯万文; 王言理^*

来源：临床肝胆病杂志, 2021, 37(05): 1126-1131.

• 癌,肝细胞
• DNA,环状
• 细胞生理学现象

目的探究环状RNA(circRNA)hsacirc0091579在肝细胞癌(HCC)细胞系中的表达及其对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2和人正常肝细胞系HL-7702。从细胞中提取RNA,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsacirc0091579在HCC细胞系及人正常肝细胞系中的表达,并进行对比。针对hsacirc0091579的环化拼接位点设计siRNA,在体外HepG2和HuH-7细胞中转染hsacirc0091579 siRNA,并用qRT-PCR验证其有效性。实验分为siRNA组(hsacirc0091579 siRNA)和NC组(negative control siRNA),并在HepG2和HuH-7细胞中用CCK8实验、流式细胞术、划痕实验以及Transwell实验分别研究hsacirc0091579对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶点进行验证。计量资料两组间比较采用t检验。结果与hsacirc0091579在人正常肝细胞系HL-7702中的表达水平相比,其在HCC细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2中的表达水平均明显升高(t值分别为14.27、36.34、26.70、36.16,P值均<0.001)。与NC组相比,hsacirc0091579 siRNA可在HepG2和HuH-7细胞中有效沉默hsacirc0091579(t值分别为14.22、27.20,P值分别为0.005、0.001)。CCK8实验和流式细胞术结果显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05);划痕实验和Transwell实验显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(t值分别为19.63、13.61、20.75、18.45,P值分别为0.003、0.005、0.002、0.003)。荧光素酶报告基因实验结果显示,与NC组相比,miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p均能明显降低野生型荧光素酶质粒的活性(t值分别为10.01、9.13、61.49,P值分别为0.010、0.012、<0.001)。结论 hsacirc0091579在HCC细胞系中高表达,可能通过抑制miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p发挥其癌基因的作用。

• 单位
  连云港市第一人民医院