布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法的建立

作者：巫秀红; 刘庆斌; 张永红; 郭俊林; 张玮^*; 崔德凤^*

来源：北京农学院学报, 2021, 36(03): 78-82.

DOI：10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2021.0314

• 布鲁氏菌
• 外膜蛋白Omp 25
• 荧光定量PCR

【目的】根据DNA序列数据库上已公布的布鲁氏菌外膜蛋白(outer membrane protein, Omp) Omp 25基因,设计一对引物和荧光探针,通过反应体系优化,建立一种布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。【方法】以构建的外膜蛋白目的片段重组质粒为标准品,验证该方法的灵敏度、特异性,通过优化反应条件,建立标准曲线。通过对34份已知临床背景的样品检测,验证该方法的敏感性。【结果】建立的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,特异性验证符合率100%,最低检测限约为100 copies/μL,敏感度的检出率为100%,建立标准曲线的R2为0.994,扩增效率99.73%。【结论】建立的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于布鲁氏菌的检测。

• 单位
  北京农学院