两种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠免疫保护效果的评估

作者:甄晶博; 刘家欣; 林立浩; 孙凤; 张玉恒; 王瑞彪; 李志欣; 韩阳; 刘照琨; 路义鑫*
来源:中国兽医科学, 2023, 53(06): 750-756.
DOI:10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0083

摘要

为评估旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对BALB/c小鼠的免疫保护作用,选用2种重组表达的Serpin型和Kazal型旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI和TsKaSPI),联合弗氏佐剂通过腹腔注射的方式单独免疫小鼠,用间接ELISA法检测免疫后小鼠特异性血清抗体Ig G以及Ig G亚型(IgG1和Ig G2a)的水平,用CCK-8法测定重组蛋白刺激后脾淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养液上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-12和IL-4的水平;使用旋毛虫肌幼虫攻击感染免疫后的小鼠,计算并分析小鼠肠道成虫减虫率及肠道病理变化,并评估TsAdSPI和TsKaSPI与ISA206佐剂联合免疫小鼠后对小鼠肠道成虫减虫率的影响。结果表明,与PBS组相比,2种重组蛋白所诱导的Ig G和Ig G亚型抗体水平均明显升高,IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10表达水平也均显著升高,且重组蛋白可诱导免疫小鼠脾淋巴细胞的体外增殖;攻虫结果表明,2种重组蛋白免疫后小鼠肠道旋毛虫成虫数量较PBS组显著减少且肠道病理变化减轻;2种重组蛋白联合免疫组的成虫减虫率高于单独免疫组。上述结果表明,重组蛋白TsAdSPI和TsKaSPI均可诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,并且能够在一定程度上阻止旋毛虫肌幼虫对小鼠肠道的入侵,减轻旋毛虫对小鼠肠道的病理损伤,且TsAdSPI和TsKaSPI联合免疫降低旋毛虫入侵的效果更显著。

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