用重组PCR技术缺失突变人单核细胞趋化蛋白-1基因

作者：仲琳; 张运; 张梅; 季晓平; 李大庆; 张岩; 张冰; 杨军; 刘少荣

来源：山东大学学报(医学版), 2004, 42(06): 698-701.

DOI：10.3969/j.issn.1671-7554.2004.06.023

• 单核细胞化学吸引蛋白质1
• 基因缺失
• 克隆
• 分子
• 重组聚合酶链反应 Monocyte chemoattractant protein-1
• Gene deletion
• Cloning
• molecular
• Polymerase chain reaction
• recombiant

目的:用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白鄄1(hμMCP鄄1)基因cDNA进行缺失突变,构建其突变体—7NDcDNA。方法:根据hμMCP鄄1基因缺失突变前后的两段基因分别设计两对含有酶切位点的引物,以pBluescript鄄hμMCP鄄1为模板,进行重组PCR反应,将PCR产物与T载体连接进行TA克隆,酶切鉴定并测序确定其长度为342bp,继之将目的基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体。结果:成功构建hμMCP鄄1cDNA突变体—7ND的真核细胞表达载体,测序结果表明,该突变体N端第2至8位氨基酸缺失。结论:重组PCR技术是十分有效、可靠的基因缺失突变方法。

• 单位
  烟台毓璜顶医院; 齐鲁医院