SynGAP(1-700aa)中670-685aa缺失突变质粒的构建及表达

作者：张清秀; 魏秀娥; 高红; 荣良群

来源：东南大学学报(医学版), 2016, 35(06): 832-835.

• SynGAP
• 重叠延伸聚合酶链式反应
• 缺失突变

目的:缺失突变SynGAP(1-700aa)-Flag中的670-685aa片段,为后续实验中新的药物靶点的鉴定提供可靠理论依据。方法:以前期构建好的p CMV-SynGAP(1-700aa)-Flag质粒为模板,重叠延伸PCR技术缺失突变670-685aa片段,扩增出目的片段;限制性内切酶将载体线性化,然后分别纯化目的片段与线性化载体;利用同源重组技术连接目的片段与线性化载体,获取重组质粒;PCR技术鉴定重组质粒构建成功,测序进一步验证质粒碱基正确;将质粒转入293T细胞,免疫印迹鉴定能否成功表达。结果:重叠PCR成功缺失突变670-685aa片段,成功构建重组质粒,且测序正确。免疫印迹结果表明,SynGAP(1-700aa)缺失突变670-685aa片段后仍可成功表达。结论:成功缺失突变SynGAP(1-700aa)中的670-685aa片段,并且在细胞株中稳定表达。该质粒的成功构建,为我们的后续研究奠定实验基础。

• 单位
  第二附属医院神经内科; 徐州医科大学