体外斑点杂交筛选靶向多重耐药鲍曼不动杆菌高效反义核酸序列实验研究

作者：梁树梅; 何云燕; 夏云; 王慧娟; 王立朋

来源：中国抗生素杂志, 2014, 39(8): 620-624.

DOI：10.3969/j.issn.1001-8689.2014.08.013

• 鲍曼不动杆菌
• gyrA
• 斑点杂交
• 反义寡核苷酸
• 肽核酸

目的 体外斑点杂交实验模拟体内环境验证计算机辅助软件设计的反义寡核苷酸序列的活性.方法 采用计算机辅助软件对多重耐药鲍曼不动杆菌生长必须基因gyrA的mRNA进行二级结构分析计算,设计出10条反义寡核苷酸序列,合成探针与体外转录并用地高辛标记的gyrA mRNA进行斑点杂交,分别选择一条杂交信号最强和一条杂交信号弱的探针序列合成连接穿膜肽序列的肽-肽核酸,以不同浓度的肽-肽核酸处理鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606和多重耐药株,测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度A600值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用.以20μmol/L杂交信号强的肽-肽核酸作用于铜绿假单胞菌,测细菌光密度A600值,观察其对细菌生长的抑制作用.结果 杂交信号强的肽-肽核酸对多重耐药的鲍曼不动杆菌和ATCC 19606均有明显的体外抗菌活性,其最低抑菌浓度分别为5与10μmol/L,10μmol/L浓度时对两种细菌均具有杀菌活性,而杂交信号弱的肽-肽核酸对细菌的生长无抑制作用,即使将其浓度增加到20μmol/L.杂交信号强的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌无生长抑制作用.结论 体外斑点杂交实验能够验证计算机软件预测设计的具有特异性的反义核酸的活性,为体外可靠、快速、高通量筛选高效反义序列提供了一种有效的方法,并且为筛选所有基因高效反义序列搭建了一个平台.

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆市中山医院