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摘要
根据GenBank中猪白介素17A(interleukin-17A,IL-17A)的基因序列,设计特异性引物,构建阳性重组质粒,并以重组质粒为模板,建立定量检测猪IL-17A的荧光染料(SYBR GreenⅠ)实时PCR(RT-PCR)检测方法。结果显示:PCR扩增片段大小242 bp,与GenBank已知基因序列同源性100%;建立的RT-PCR检测方法在101～106拷贝/μL时,标准模板的Ct值与浓度之间有较好的线性关系,扩增曲线呈"S"型,R2≥0.997 7;熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好;仔猪外周血中IL-17A mRNA转录定量检测发现,人工感染猪圆环病毒2型(PCV2)猪外周血中IL-17A mRNA的表达量明显升高,且在第7天达到高峰值。本研究为IL-17A基因转录的定量检测提供了技术支持,同时验证了IL-17A可作为检测PCV2感染的新型标志物。
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单位山东农业大学; 山东省滨州畜牧兽医研究院; 动物科技学院
