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摘要
通过依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）技术建立一种快速检测发酵乳中植物乳杆菌的方法。根据植物乳杆菌scrB基因序列（基因号为AJ579541.1）设计特异性引物，通过实验筛选出检测体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的较优含量，达到最优反应条件。所建立的HDA方法通过人工添加植物乳杆菌确定检出限，通过多种菌株扩增验证方法特异性，通过扩增产物电泳和序列比对分析验证方法一致性和稳定性。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中植物乳杆菌，反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的适宜添加量分别为0.15μg和5.0μg，特异性良好，与涉及的其他菌株均未发生扩增，检出限为2.8×101 CFU/g，扩增序列与设计序列长度（273 bp）一致且序列同源性为100%；本研究建立的方法可以快速检测发酵乳中植物乳杆菌，具有灵敏度高、操作简单、应用前景广等特点。
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单位河北省食品检验研究院
