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摘要
背景:近年来研究发现,干细胞所发挥的组织修复与再生功能在很大程度上是通过旁分泌作用实现的,外泌体作为其中一种重要的旁分泌因子,已经被证实在心脏、神经、骨、视网膜损伤修复及再生方面发挥重要作用,研究人员也在寻找更好的干细胞来源外泌体。目的:提取并鉴定人尿源性干细胞来源外泌体。方法:收集健康成年男性新鲜尿液,采用贴壁培养法分离得到人尿源性干细胞,对其进行培养、传代。流式细胞术鉴定其表面标记物,体外定向诱导其向成骨细胞、脂肪细胞分化,分别采用茜素红、Von Kossa和油红O染色进行鉴定。采用改良超高速离心法从人尿源性干细胞培养上清中提取外泌体,透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析其大小及浓度,蛋白质免疫印迹法检测其特异性蛋白CD9、CD63和HSP70的表达。结果与结论:(1)人尿源性干细胞培养3-5 d后开始贴壁生长,细胞在原代时呈"铺路石"样,第1代和第2代细胞呈"米粒"样,传至第3代后逐渐呈"纺锤形"或"梭形";流式细胞仪检测结果显示人尿源性干细胞阳性表达间充质干细胞的特异表面标志物CD44、CD73、CD90和CD105;人尿源性干细胞经成骨、成脂诱导培养后能成功分化为成骨细胞、脂肪细胞;(2)经过低速、高速、超高速序列离心方法,从人尿源性干细胞的条件培养基中提取外泌体,透射电镜观察呈圆形或者椭圆形膜性囊泡样,形似"茶托",大小主要集中在64-141 nm之间,蛋白质免疫印迹分析显示人尿源性干细胞来源外泌体表达CD9、CD63和HSP70蛋白;(3)该研究证实了改良超高速离心法提取人尿源性干细胞外泌体的可行性。
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