具有溶栓和脑保护作用的融合蛋白的表达、纯化及活性研究（英文）

作者：陈欢; 郑丹萍; 刘晓岩; 朱元军^*; 王银叶^*

来源：Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2018, 27(11): 787-798.

• 缺血性脑卒中
• 溶栓
• 神经保护
• 融合蛋白

为了验证溶栓剂联合神经保护剂治疗可能比单纯溶栓治疗产生更好的治疗效果的假设,通过融合NR6和BH4设计了一种具有溶栓和神经保护双重功能的蛋白质TBN。NR6是通过将两个RGD序列引入溶栓蛋白AcAP5获得的,BH4是抗凋亡蛋白Bcl-xL的关键结构域。编码TBN和NR6的DNA合成后分别克隆到pET30a和pET16b载体中,两种蛋白都在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达。NR6带有His标签,通过镍亲和层析纯化,而TBN通过离子交换层析纯化,纯化后的蛋白通过透析使其复性。通过大鼠动静脉旁路模型评价两种蛋白质的溶栓活性,在低剂量(6 nmol/kg)时, NR6和TBN具有一定的降低血栓重量的作用(P<0.05),高剂量(24nmol/kg)时二者可显著降低血栓重量。并且TBN表现出与NR6相同的溶栓作用,表明NR6在融合蛋白TBN中的功能未受影响。通过小鼠血栓栓塞性大脑中动脉堵塞(eMCAO)模型评价两种蛋白质对脑卒中的治疗效果,结果显示TBN降低梗死体积和抑制细胞凋亡的效果优于NR6。通过小鼠尾出血实验评价目的蛋白的出血副作用,结果发现与tPA相比, NR6和TBN的出血时间较短。这些结果证实了我们的假设:溶栓联合神经保护治疗缺血性脑卒中的效果优于单独溶栓治疗。这两个蛋白具有作为新型溶栓候选药进一步开发的潜力。