利用单个B细胞制备人源SARS-CoV-2刺突蛋白单克隆抗体

作者：冯泽众; 路阳; 李佳莹; 马平; 王英楠; 朱瑾琪; 孙金福^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(01): 48-52.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003806

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 单个B细胞
• 单克隆抗体
• S蛋白

目的 利用单个B细胞制备人源严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)单克隆抗体，并检测其中和活性。方法 采集经2次SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)免疫，且抗体水平较高的人静脉血，用人外周血淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，经偶联S蛋白的磁珠分选表达S蛋白抗体的单个B细胞。将单个B细胞反转录后，用套式PCR法扩增IgG重链、轻链可变区基因；通过重叠PCR法将可变区基因与CMV启动子及IgG leader序列DNA片段、IgG恒定区及PolyA序列DNA片段连接，构建抗体线性表达盒。将同一B细胞的重链、轻链线性表达盒转染HEK293T细胞，表达人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体。免疫荧光法检测抗体免疫反应活性，假病毒中和试验检测抗体中和活性。结果 共表达了26株SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体，经Western blot检测，于相对分子质量约55 000和25 000处可见IgG抗体重链、轻链的蛋白条带。表达的单克隆抗体具有S蛋白特异性抗体免疫反应活性。26株单克隆抗体中，20株具有中和活性，抗体半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentrations,IC50)在0.040～0.545μg/mL之间。结论 制备的人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体具有较高的中和活性，有望应用于新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19))治疗药物和检测试剂的研发。

• 单位
  东北大学