一种快捷有效的构建cDNA文库的方法

作者：徐远峰; 黄文峰; 高艳梅; 翟金玲; 黄惜

来源：贵州科学, 2009, 27(03): 71-75.

DOI：10.3969/j.issn.1003-6563.2009.03.016

• 红海榄
• cDNA文库
• T-载体

构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段,传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列,通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端,然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括:(1)通过反转录合成cDNA第一条链,通过置换底物的方式在cDNA 3’末端合成接头序列。(2)利用cDNA两端的接头引物,通过Taq DNA合成酶PCR扩增合成cDNA第二条链。(3)将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。(4)将连接物转化大肠杆菌,得到cDNA文库。利用本方法,我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在0.5~3.0 kb之间,大部分cDNA的长度在500~1000bp之间,表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点,而且适用于任何高等生物RNA样品。

• 单位
  中国热带农业科学院; 海南大学