超声联合微泡体外介导NT-3基因转染神经干细胞的超声占空比探讨

作者：谭文; 万圣祥; 陈芸; 宫琳; 严飞; 郑海荣; 江长青

来源：中华显微外科杂志, 2012, 35(4): 307-309,后插6.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-2036.2012.04.014

• 超声占空比
• 微泡
• 基因转染
• 神经营养因子-3
• 神经干细胞

目的 探讨低频超声体外介导神经营养因子-3 (neurotrophin-3,NT-3)基因转染神经干细胞的适宜超声占空比条件. 方法 体外培养神经干细胞,在24孔板中加入200μl微泡(浓度20％)和20μl pEGFP-NT-3基因重组质粒(1 μg/μl)混合静置30 min.将500μl神经干细胞悬液(3×105/ml)加入到微泡和质粒混合液中,采用超声声强1.5 W/cm2,照射时间60s,占空比分别为10％、25％和50％.用1 MHz超声探头辐照上述混合液,转染后用流式细胞仪检测各组细胞基因转染率,MTT法检测神经干细胞存活率.空白对照组为未经超声辐照的质粒与神经干细胞混合物. 结果 随着超声占空比升高,细胞存活率逐渐降低.占空比为50％时,细胞存活率低于40％；占空比为25％时,细胞存活率高于60％,且基因转染率明显高于占空比10％和50％组,为(18.60±0.90)％. 结论 通过优化超声占空比条件,证明适宜的超声占空比为25％,神经干细胞转染率最高,且细胞损伤较小.

• 单位
  中国科学院深圳先进技术研究院; 北京大学深圳医院