P[1]型A群牛轮状病毒VP8重组蛋白的表达与免疫原性研究

作者：姜晓明; 汤承; 岳华^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(05): 1970-1976.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.05.038

• A群牛轮状病毒(BRVA)
• P[1]型
• VP8蛋白
• 原核表达
• 免疫原性

【目的】利用原核表达系统表达P[1]型A群牛轮状病毒(BRVA) VP8重组蛋白，并评价其反应原性与免疫原性。【方法】根据国内流行毒株RVA/Cow-tc/CHN/SDA2/2018/G6P[1]VP8基因序列(GenBank登录号：MN937517)进行密码子偏好性优化，构建P[1]型BRVA VP8大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE分析重组蛋白表达形式。镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白，Western blotting鉴定重组蛋白与兔抗G6P[1]型BRVA血清特异性结合能力，并将P[1]型BRVA VP8重组蛋白免疫兔，首免后2周加强免疫1次，共免疫2次。分别用间接ELISA方法与中和试验评价其免疫原性。【结果】本研究成功构建P[1]型BRVA VP8重组蛋白的原核表达系统；SDS-PAGE结果显示，高效表达大小为20 ku的P[1]型BRVA VP8重组蛋白，以可溶形式存在；Western blotting结果显示，P[1]型BRVA VP8重组蛋白能与兔抗G6P[1]型BRVA血清特异性结合；间接ELISA结果显示，P[1]型BRVA VP8重组蛋白亚单位疫苗能诱导兔产生抗体，兔首免1周后抗体开始出现并迅速上升，于第3周达到高峰，至第5周仍维持在较高水平；中和试验结果显示，第2次免疫后抗体最高的兔血清对G6P[1]型和G8P[1]型BRVA的中和效价分别为1∶17 783和1∶64。【结论】本研究成功构建原核表达系统表达P[1]型BRVA VP8重组蛋白，并证实其具有良好的反应原性及免疫原性，为研制BRVA亚单位疫苗奠定基础。

• 单位
  西南民族大学