摘要

目的:研究蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及周期阻滞的能力并对其分子机制进行探讨。方法:将人结肠癌HT-29细胞分为对照组(野生型细胞),蟾毒灵(Bufalin)处理组(0.25,0.5,1μmol/L)和顺铂(DDP)组(1μg/mL)。通过流式细胞术(FCM)检测蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及周期阻滞的作用;使用蛋白质免疫印迹法检测经蟾毒灵处理HT-29细胞24 h后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达的变化。通过实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测蟾毒灵对HT-29细胞PI3K、Akt mRNA表达的影响。结果:FCM结果显示,与对照组比较,蟾毒灵(0.25,0.5,1μmol/L)组能诱导结肠癌HT-29细胞的凋亡(P<0.05),并呈剂量依赖性。与对照组比较,蟾毒灵(0.25,0.5,1μmol/L)组能够诱导结肠癌HT-29细胞的周期阻滞于G2/M期,并且蟾毒灵浓度越大,周期阻滞效果越显著(P<0.05)。蛋白质印迹实验结果表明,与对照组比较,蟾毒灵能够下调PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达水平,并呈一定的剂量依赖(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与对照组比较,蟾毒灵能够显著下调PI3K和Akt mRNA的表达。结论:蟾毒灵能够诱导结肠癌HT-29细胞凋亡及周期阻滞,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

  • 单位
    河南省中医药研究院; 周口市中心医院