苏云金芽胞杆菌aiiA的5'端侧翼序列的克隆与功能鉴定

作者：陈少威; 吴程; 苏月华; 蔡斌斌; 谢盼盼; 杨梅^*

来源：生物技术通报, 2018, 34(11): 136-143.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0439

• 苏云金芽胞杆菌
• 群体感应
• 启动子
• N-酰基高丝氨酸内酯酶
• 定点突变

为了研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine Lactonase,AiiA蛋白)表达调控机制,确定aiiA的启动子区域。本研究克隆了aiiA的5’端侧翼区(aP-1930--1),以gfp作为报告基因,分段克隆aiiA的5’侧翼区,鉴定启动子活性,并对aiiA启动子序列中的碱基对-150和-142之间的2个连续的TATA盒进行定点突变。结果显示,侧翼序列aP-295--101和aP-295--1可作为启动子,实现GFP在大肠杆菌中的异源表达,启动子序列aP-295--101比aP-295--1活性更强,aP-101--1序列不能启动GFP表达。定点突变pET28a-aP-295--101-gfp载体2个TATA盒显著降低GFP表达。表明-295--1bp为aiiA的启动子区,-429--296与-100--1序列是aiiA的负调控序列。-150--142 bp区域的2个TATA盒对aiiA的5’侧翼区域的启动子活性起关键的作用。

• 单位
  生命科学学院; 福建师范大学