黑果枸杞高效植株再生与遗传转化体系的建立

作者：张虹; 安迎瑞; 张君; 郎思睿; 陈任^*

来源：核农学报, 2022, 36(05): 929-936.

• 黑果枸杞
• 组织培养
• 植株再生
• 遗传转化
• 农杆菌介导

为建立高效的黑果枸杞组织培养与遗传转化体系，本研究以黑果枸杞叶片、茎节、茎段为外植体，在含有不同浓度组合的NAA和BAP培养基上进行愈伤组织和不定芽诱导比较；选择黑果枸杞叶片为材料，采用农杆菌介导法，将带有绿色荧光蛋白基因(sGFP)的双元表达载体导入黑果枸杞，探讨侵染时间和抗生素浓度对遗传转化效果的影响。结果表明，黑果枸杞的最适植株再生体系为：以叶片为外植体，MS基本培养基中添加0.5 mg·L-1 NAA和0.3 mg·L-1 BAP,愈伤组织诱导率为88.56%,不定芽诱导率为54.54%,将不定芽置于1/2MS培养基中进行生根诱导，生根率为95%;稳定高效的遗传转化体系为：农杆菌侵染液OD600为0.25,共培养3 d,卡那霉素(kanamycin)和羧苄西林(carbenicillin)浓度分别为25和250 mg·L-1。愈伤组织和不定芽诱导时经卡那霉素和荧光标记双重选拔，愈伤组织阳性率为85.47%,出芽生根后经PCR鉴定，阳性转化率为29%;利用实时荧光定量PCR检测转基因植株，导入的外源sGFP基因均有较高的表达水平。本研究为利用基因工程技术对黑果枸杞进行品种改良提供了技术支撑。

• 单位
  生命科学学院; 宁夏大学