TNF-SP-EGFP融合蛋白的构建表达及亚细胞定位

作者：朱建华; 王晶; 梁慧芳; 秦娜琳; 庞燕; 程熠; 杨薇; 吴乙璇; 冯玮; 姜晓丹; 李卓娅

来源：华中科技大学学报(医学版), 2007, (04): 429-432.

• 肿瘤坏死因子信号肽
• 绿色荧光蛋白
• 融合蛋白

目的探讨肿瘤坏死因子信号肽(TNF-SP)在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,以TNF-SP-pcDNA3.0质粒为模板扩增TNF-SP基因,采用PCR产物的粘端克隆法,将TNF-SP定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建TNF-SP-EGFP重组质粒,酶切,PCR检测,序列分析鉴定,采用脂质体转染法,将TNF-SP-EGFP融合基因转染COS-7细胞进行表达,经碘化丙啶(PI)染色后以激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因TNF-SP正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点。TNF-SP-EGFP重组体转染COS-7后,激光共聚焦显微镜显示TNF-SP-EGFP在细胞质表达。结论成功地构建了TNF-SP-EGFP融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达,并证实其定位于细胞质。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院