辣椒胎座cDNA酵母文库构建和鉴定

作者：黄祝兵; 朱张生; 张霜霖; 宋佳丽; 陈长明; 雷建军^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(13): 4317-4323.

DOI：10.13271/j.mpb.018.004317

• 辣椒素类物质
• 辣椒
• 酵母
• 胎座cDNA文库

辣椒素类物质是辣椒属植物特有的一种次生代谢产物,特异地在辣椒果实胎座中合成,且具有明显的发育阶段特异性。辣椒素合成途径相关基因主要在辣椒花后16 d胎座发育至绿熟期转录,然而转录调控的精细分子机制尚不太清楚。用已知参与调控辣椒素生物合成的转录因子为诱饵,采用酵母双杂交技术从辣椒素合成阶段酵母cDNA文库中筛选与其互作的蛋白,有利于明确辣椒素生物合成的转录调控机制。因此,获得辣椒素合成阶段的高质量酵母cDNA文库是关键。本研究采用辣椒‘59’自交系花后16 d (DPA)的RNA作为模板,之后用SMART c DNA/均一化c DNA文库技术(Switching mechanism at 5’end of the RNA transcript)与同源重组的方法将‘59’自交系的胎座cDNA文库转化酵母感受态Y187。通过对收集的文库进行鉴定发现,滴度达到3.63×107CFU/m L,插入片段大约250～2 000 bp,文库满足酵母双杂交要求。辣椒胎座高质量cDNA文库的构建为后续辣椒素生物合成的转录调控网络研究提供了基础。

• 单位
  华南农业大学; 农业部