大鼠嘌呤能受体P2X4稳定表达细胞系的建立及功能的验证

作者：李琳琳; 周培岚; 苏瑞斌

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2014, 28(03): 426-431.

• 受体,嘌呤能P2,鼠源
• HEK293细胞

目的建立大鼠嘌呤能受体P2X4(rP2X4)稳定表达细胞系,并对细胞系功能进行验证。方法构建绿色荧光蛋白rP2X4受体(pEGFP-N1-rP2X4)重组质粒,采用脂质体转染法将pEGFP-N1-rP2X4转染于人胚肾(HEK293)细胞,采用抗生素G418(1 g·L-1)压力筛选,qRT-PCR和Western蛋白质印迹法验证rP2X4受体的表达量。全细胞膜片钳技术检测稳定表达的rP2X4受体Ca2+电流。结果测序结果表明,pEGFP-N1-rP2X4重组质粒序列完全正确;采用脂质体法稳定转染HEK293细胞后,qRT-PCR和Western蛋白质印迹法结果表明,HEK293-pEGFP-N1-rP2X4稳定转染细胞系在连续传代25代后(1,3,5,10,15,20和25代)rP2X4受体均保持稳定表达;全细胞电流记录实验表明,嘌呤受体激动剂ATP 3.0μmol·L-1能激活HEK293-pEGFP-N1-rP2X4细胞上表达的rP2X4受体并产生特异性激活电流,且该电流能被非选择性P2X4受体拮抗剂三硝基苯酚(TNP)-ATP(30.0μmol·L-1)阻断。结论 HEK293-pEGFP-N1-rP2X4稳定转染细胞系上rP2X4受体表达稳定,激活后能产生特异性激活电流。该细胞系可用于rP2X4受体的药物筛选及其机制研究。

• 单位
  军事医学科学院毒物药物研究所