基于单克隆抗体的非洲马瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

作者：郭奎; 张泽楠; 王垚鑫; 李帅杰; 初晓雨; 郭巍; 胡哲^*; 王晓钧^*

来源：中国农业科学, 2023, 56(16): 3237-3246.

• 非洲马瘟病毒
• 单克隆抗体
• 间接ELISA
• 应用

【目的】为有效应对非洲马瘟（African horse fever, AHS）传入我国的风险，研究建立一种基于单克隆抗体（Monoclonal antibody, Mab）的非洲马瘟病毒（African horse fever virus, AHSV）特异性的间接ELISA(indirect ELISA, iELISA)抗体检测方法，利用该方法对我国马匹进行非洲马瘟抗体监测。为有效诊断非洲马瘟提供血清学检测手段。【方法】首先利用AHSV VP7抗原免疫小鼠制备针对VP7抗原的单克隆抗体；其次通过对包被抗体浓度、蛋白浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度等反应条件的优化建立AHSV iELISA抗体检测方法。利用1 000份血清确定该方法的临界值，并评估该方法的敏感性和特异性。由3位试验操作者分别对AHSV敏控阳性血清进行加速试验测定效价，评估该方法的稳定性。通过利用建立的方法对已知的10份AHSV阳性血清和400份阴性血清进行检测并与国外商品化试剂盒检测结果进行比较；最后用该方法对我国2021年18个省份或地区的947份临床样本进行检测来评估我国马匹中AHSV感染风险。【结果】获得了5株针对AHSV VP7抗原的单克隆抗体。通过对5株单克隆抗体筛选确定3G9单克隆抗体捕获抗原性能最佳。利用3G9抗体作为包被抗体，通过对不同反应条件优化建立了AHSV iELISA抗体检测方法。确定该方法的临界值为0.25；经比对试验证实本研究建立的AHSV iELISA方法的敏感性与商品化试剂盒相当。3位操作者分别对敏控血清进行检测，组内变异系数范围分别为3.19%—7.02%、0%—3.11%、0.27%—5.76%，组间变异系数为1.17%—5.03%。37℃加速试验表明AHSV阳性血清7 d内效价稳定，因此证明该方法具有良好的稳定性。该方法与商品化试剂盒进行比较两者总体符合率为100%。通过对我国18个省或地区的947份马血清进行检测，结果表明AHSV抗体阳性率为0%。【结论】成功筛选到了针对AHSV VP7的单克隆抗体，建立了一种基于单克隆抗体的AHSV iELISA抗体检测方法，该方法具有特异性强、敏感性高、稳定性好，可以实现临床样本中AHSV抗体的检测，因此可以作为AHS血清学监测的一种有效工具。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所