RNF146真核表达载体的构建及其对非小细胞肺癌细胞系生物学行为的影响

作者：高英; 惠林萍; 宋成洋; 徐慧慧; 王睿; 田大力; 邱雪杉; 王恩华

来源：山西医药杂志(下半月刊), 2014, 43(07): 723-849.

• 癌,非小细胞肺
• 泛素蛋白连接酶类
• RNF146
• 增殖

目的构建E3泛素连接酶环指蛋白146(RNF146)基因真核表达载体,研究RNF146对非小细胞肺癌细胞系体外生物学行为的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法筛选RNF146低表达细胞系。构建pEX4-RNF146真核表达载体,经酶切和测序后瞬时转染LTE细胞,荧光显微镜观察、蛋白印迹法检测转染效率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测肿瘤细胞体外增殖能力,划痕实验评价肿瘤细胞体外迁移能力,Buyden小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果酶切和基因测序证实重组质粒pEX4构建正确。MTT比色实验显示转染pEX4-RNF146组细胞增殖速度明显高于转染空载体组和未转染组(P<0.05)。划痕实验显示转染组细胞24h迁移率明显高于空载体组和未转染组(P<0.05)。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜数目明显增多(P<0.05)。结论 RNF146基因转染能促进非小细胞肺癌LTE细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,可能是一个潜在的促肿瘤增殖、侵袭和转移的相关基因。

• 单位
  中国医科大学; 基础医学院; 中国医科大学附属第一医院; 中心实验室; 中国医科大学附属第四医院