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摘要
目的探讨槲皮素抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和阻滞细胞周期机制。方法人瘢痕疙瘩成纤维细胞购自上海生命科学研究院细胞资源中心。分别以10 μmol/L及40 μmol/L浓度槲皮素处理细胞(记为10 μmol/L槲皮素组、40 μmol/L槲皮素组);分别将miR-NC、微小核糖核酸200c(miR-200c)转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞(记为miR-NC组、miR-200c组);将抗miR-NC、抗miR-200c分别转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞, 再用40 μmol/L浓度槲皮素处理(记为40 μmol/L槲皮素+抗miR-NC组、40 μmol/L槲皮素+抗miR-200c组)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-200c表达水平;蛋白质印迹法检测磷酸化雷帕霉素的哺乳动物靶标(p-mTOR)蛋白表达。两组间比较采用t检验;多组间比较用单因素方差分析(两组间比较用LSD-t检验)。结果 10 μmol/L及40 μmol/L浓度槲皮素组瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖率、S期显著低于Control组[增殖率分别(66.85±7.04)%、(43.86±5.73)%比(98.65±9.64)%, S期分别(19.47±2.43)%、(13.87±2.22)%比(28.95±3.86)%], G0/G1期及miR-200c表达表达显著高于Control组[G0/G1期分别(50.44±4.43)%、(59.45±6.22)%比(40.68±6.86)%, miR-200c表达分别1.74±0.33、2.64±0.48比1.00±0.12], 差异有有统计学意义(F=386.976、243.858、376.886、185.643, P<0.05)。miR-200c组瘢痕疙瘩成纤维细胞miR-200c表达和G0/G1期显著高于miR-NC组细胞[miR-200c表达为2.50±0.37比1.02±0.10, G0/G1期为(58.46±3.11)%比(42.57±5.97)%], 细胞增殖率、S期和p-mTOR蛋白表达显著低于miR-NC组细胞[细胞增殖率为(48.49±4.98)%比(98.56±9.56)%, S期为(15.05±3.11)%比(27.84±2.58)%, p-mTOR蛋白表达为0.33±0.03比0.89±0.08], 差异有统计学意义(t=19.064、39.764、34.864、28.979、14.176, P<0.05)。40 μmol/L槲皮素+抗miR-200c组瘢痕疙瘩成纤维细胞miR-200c表达、G0/G1期显著低于40 μmol/L槲皮素+抗miR-NC组细胞[miR-200c表达为0.37±0.03比1.01±0.11, G0/G1期为(48.83±5.11)%比(57.84±6.30)%], 细胞增殖率、S期和p-mTOR蛋白表达显著高于40 μmol/L槲皮素+抗miR-NC组细胞[细胞增殖率为(99.57±7.93)%比(50.73±5.92)%, S期为(27.94±3.10)%比(16.84±2.94)%, p-mTOR蛋白表达为0.88±0.08比0.30±0.03], 差异有统计学意义(t=16.863、39.125、40.877、26.774、15.754, P<0.05)。结论槲皮素可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及阻滞细胞周期, 其机制可能与上调miR-200c表达而抑制mTOR信号通路有关。
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单位天津医科大学第二医院; 实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院血液病医院; 中国医学科学院血液学研究所
