含RGD肽CP9修饰的聚乙烯亚胺复合物的理化特性及其转基因功能的研究

作者：李达; 王青青; 汤谷平; 李经忠; 黄宏靓; 沈芬平; 余海

来源：浙江大学学报(医学版), 2006, 35(06): 615-621.

DOI：10.3785/j.issn.1008-9292.2006.06.008

• 聚乙烯亚胺
• 转基因
• 遗传载体
• 精氨酸
• 甘氨酸
• 天冬氨酸
• RGD

目的:构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽CP9修饰的聚乙烯亚胺(PE I),观察其理化特性和转基因功能。方法:通过琥珀酰亚胺-3-(2-嘧啶二硫)丙酸酯(N-Succin im idy l-3-(2-pyridy ld ith io)]prop ionate,SPDP)将CP9偶联到PE I上,合成新型转基因载体CP9-PE I。用1H-NMR和FT-IR验证CP9的偶联;用凝胶电泳阻滞实验、电镜和粒径检测,观察CP9-PE I浓缩质粒DNA的能力以及浓缩质粒DNA后形成的转染颗粒形态和粒径;通过CP9-PE I在人肝癌细胞株H epG 2中的转染实验来验证CP9对PE I的转染效率的影响;通过游离CP9肽的竞争抑制实验验证CP9-PE I的整合素靶向功能。结果:CP9成功偶联到PE I上;CP9-PE I能有效浓缩质粒DNA,形成的转染颗粒形态为圆形或类圆形,在N/P比为10时,粒径约为200 nm。CP9-PE I的转染效率是PE I的2倍,游离CP9肽能抑制CP9-PE I的转染效率。结论:修饰了CP9的PE I能有效增加转染效率,具有整合素的靶向能力,是一种具有应用前景的转基因载体。

• 单位
  浙江大学