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摘要
目的研究Notch信号通路对婴幼儿血管瘤间充质干细胞(Hem-MSCs)增殖的影响。方法通过手术获取南京医科大学附属儿童医院烧伤整形科收治的25例婴幼儿血管瘤标本, 患儿男15例, 女10例, 年龄3个月至4岁, 皆为单发血管瘤, 增生期15例, 消退期10例, 另外取10例患儿瘤旁正常皮肤组织。使用实时定量荧光PCR检测增生期、消退期血管瘤及正常皮肤组织中Notch1、Jagged1及Hes1 mRNA表达情况。用贴壁筛选法从增生期血管瘤中分离Hem-MSCs, 通过流式细胞术进行鉴定。在Hem-MSCs中分别加入Notch信号通路抑制剂DAPT和激动剂Jagged1, 培养72 h后, 实时定量荧光PCR检测试剂干预前、后Hem-MSCs中Notch1、Jagged1及Hes1 mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测蛋白表达情况;CCK-8法判定细胞活性和增殖情况。资料以均值±标准差表示。2组间指标比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。结果在增生期血管瘤组织中Notch1、Jagged1及Hes1相对表达量为0.379±0.121、0.243±0.095、0.222±0.060;在消退期血管瘤组织中Notch1、Jagged1及Hes1相对表达量为0.338±0.091、0.405±0.107、0.310±0.109;在正常皮肤组织中Notch1、Jagged1及Hes1相对表达量为0.111±0.042、0.065±0.036、0.074±0.029。Notch1、Jagged1及Hes1在增生期及消退期血管瘤组织中表达均高于正常皮肤组织, 差异具有统计学意义(P值均<0.05)。Notch1在不同时期血管瘤中表达并无明显差异(t=0.896, P=0.380)。与增生期血管瘤相比, Jagged1及Hes1在消退期血管瘤中表达更高, 差异具有统计学意义, (tJagged1=3.895、PJagged1=0.007, tHes1=2.603、PHes1=0.016)。在体外成功分离培养出Hem-MSCs, 通过流式细胞术鉴定该细胞大量表达间充质干细胞标志物CD90、CD105, 不表达CD34、CD45。在Hem-MSCs中加入Jagged1后, Notch1、Jagged1及Hes1的mRNA表达量分别为1.41±0.37、2.42±0.39、1.89±0.35, 蛋白表达量为0.42±0.25、1.14±0.32、0.74±0.35, 与对照组相比, 表达量均增多, 差异有统计学意义(P值均<0.05)。加入DAPT后, Notch1、Jagged1及Hes1的mRNA表达量分别为0.58±0.31、0.56±0.21、0.43±0.15, 蛋白表达量分别为0.19±0.11、0.62±0.25、0.12±0.04, 与对照组相比, 表达量均减少, 差异具有统计学意义(P值均<0.05)。在Hem-MSCs中加入Jagged1后, 细胞吸光度A值为0.52±0.17, 与对照组相比, 细胞活性和增殖状态都受到抑制, 差异具有统计学意义(t=2.447, P=0.034), 而加入DAPT后, 细胞吸光度A值为1.14±0.24, 细胞活性和增殖状态均增强, 差异具有统计学意义(t=3.526, P=0.006)。结论 Hem-MSCs存在活化的Notch信号通路。激活Notch信号通路抑制Hem-MSCs的增殖, 抑制Notch信号通路则结果相反。
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