AD7c-NTP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化及其抗血清制备

作者：李荣贵; 汪靖超; 刑伟; 王帅; 赵仁亮; 吴光耀

来源：药物生物技术, 2005, (04): 8-12.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.2005.04.002

• 麦芽糖结合蛋白-AD7c-NTP融合蛋白
• 表达
• 纯化
• 抗血清

人工合成了编码AD7c-NTP的基因,并将其中的6种密码子GGA AGG AGA ATA CTA CCC分别突变成大肠杆菌偏爱密码子GGT CGT CGT ATC CTG CCG,PCR扩增后克隆到表达载体pMAL-c2上,构建表达质粒pMAL-AD7c,重组质粒导人E coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导实现了MBP-ADTc-NTP融合蛋白在工程菌中的高效表达,细胞裂解液经Amylose-resin亲和层析、DEAE-Sepharose离子交换层析以及Su—perdex 200凝胶过滤层析,得到了电泳纯的融合蛋白。纯化的融合蛋白免疫家兔制备了兔抗MBP-AD7c-NTP 融合蛋白的抗血清,利用该抗血清及点杂交技术,初步分析了10例AD疑似患者的尿样.结果表明5例疑似患者的尿样呈阳性,另5例呈阴性。

• 单位
  青岛大学医学院附属医院; 北京大学; 青岛大学; 生命科学学院