幽门螺杆菌毒力因子VacA促进胃上皮GES-1细胞DNA同源重组修复

作者：莫慧; 郑鹏远^*; 米阳; 孙向东; 薛福敏; 刘斌

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2019, (06).

• 幽门螺杆菌
• 同源重组修复
• GES-1细胞
• VacA

目的 检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)标准株(Hp P12)和其毒力因子VacA对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)DNA损伤和同源重组(homologous recombination,HR)修复的影响。方法 应用Hp P12和其vacA基因敲除株(Hp P12 ΔvacA)以感染复数(multiplicity of infection,MOI)＝100分别感染GES-1细胞,采用依托泊苷(50 μmol/L)或丝裂霉素(0.5 μg/ml)处理2 h的GES-1细胞作为阳性对照,Western blot和免疫荧光方法检测DNA损伤标记蛋白γH2AX、HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达水平以及在DNA损伤位点的募集情况；进一步采用Hp P12和Hp P12 ΔvacA菌株感染人胚肾HEK-293(DR-GFP)细胞系,验证VacA蛋白对HR修复的影响。结果 DNA损伤标记蛋白γH2AX的表达和募集,在Hp P12感染组较未感染组上调(P<0.05),在Hp P12 ΔvacA感染组较标准株感染组下调(P<0.05)。同样,HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达和募集,在Hp P12标准株感染组较未感染组上调(P<0.05),在Hp P12 ΔvacA感染细胞中较标准株下调(P<0.05)。进一步采用上述菌株感染I-SceⅠ质粒转染的HEK-293(DR-GFP)细胞进行验证,发现Hp P12感染组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞数下调,而Hp P12 ΔvacA感染组下调更加明显(P<0.05)。结论 Hp P12标准株感染胃上皮GES-1细胞后引起DNA损伤,促进了GES-1细胞中的HR修复,其中VacA毒力因子起到促进HR修复的重要作用。

• 单位
  郑州大学; 郑州大学第五附属医院