两种不同单克隆法筛选大鼠腰椎终板软骨干细胞能力的比较

作者：王效; 徐宏光; 肖良; 刘晨; 金中行; 沈阳

来源：齐齐哈尔医学院学报, 2018, 39(03): 306-308.

• 单克隆筛选法
• 干细胞终板软骨干细胞纯度

目的比较两种不同的单克隆方法获取大鼠腰椎终板软骨干细胞筛选能力。方法获取大鼠腰椎终板软骨组织后,Ⅱ型胶原酶消化法获取原代细胞(P0),将P0代细胞按照100个/cm2、200个/cm2、300个/cm2的密度接种于10 cm培养皿上,为P0组;将原代细胞先接种于T25培养瓶,待其贴壁融合30%40%时再消化,按照100个/cm2、200个/cm2、300个/cm2的密度接种于10 cm培养皿,为P1组。倒置相差显微镜下观察两组细胞集落形成速度及生长形态;0.1%结晶紫染色,计算两组的集落形成百分比;使用干细胞表面标记物CD44和CD90,流式细胞仪检测两组获取干细胞的纯度。结果将两组的细胞按上述密度进行培养后,P1组细胞集落形成时间早于P0组,且集落数目也较P0组多,但镜下观察其细胞形态及集落形态不如P0组;P1组的集落形成数目远大于P0组,两组按照100个/cm2的密度接种时,其细胞集落形成百分比最大;流式细胞仪检测,对于CD44,P0组表达率(92.17±1.26)%,P1组为(74.37±2.63)%;对于CD90,P0组表达率(95.30±3.42%),P1组为(90.87±1.42%)。结论两种不同的单克隆方法都可以筛选出大鼠腰椎终板软骨干细胞,但是使用原代细胞直接接种时,得到的干细胞纯度更高。

• 单位
  皖南医学院弋矶山医院