人脂肪源性血管外膜细胞对CD34+造血干/祖细胞体外支持的实验研究

作者：周芮; 杨婷婷; 张磊; 许飞; 郑波^*

来源：宁夏医科大学学报, 2021, 43(05): 453-473.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2021.05.004

• 间充质干细胞
• 血管外膜细胞
• 共培养
• 造血支持

目的建立以人脂肪源性血管外膜细胞(human adipose-derived pericyte/perivascular cells,hAD-PCs)为基质层与人脐血(umbilical cord blood,UCB)CD34+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)共培养体系,评估hAD-PCs对UCB CD34+ HSPCs的体外支持效力。方法实验分3组,实验组(hAD-PCs组)以hAD-PCs为基质细胞与UCB CD34+HSPCs共培养;阳性对照组(BMSCs组)以骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)为基质细胞与UCB CD34+ HSPCs共培养;空白组(无基质细胞组)以UCB CD34+HSPCs单独培养。在共培养的1、2、4周,倒置显微镜下观察UCB CD34+ HSPCs细胞形态;应用台盼蓝拒染法计算细胞数量;多参数流式细胞术分析血细胞标记CD45、CD34、CD33、CD19、CD10和CD14的表达;镜下观察UCB CD34+ HSPCs培养后集落形成能力;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测造血因子分泌情况。结果UCB CD34+ HSPCs细胞增殖结果显示:hAD-PCs组及BMSCs组共培养的UCB CD34+ HSPCs细胞数在第1周略有增长,无基质细胞组细胞数降低,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);第2周时hAD-PCs组和BMSCs组细胞数继续增长达到高峰,无基质细胞组细胞数持续降低,hAD-PCs组、BMSCs组细胞数量均高于无基质细胞组(P均<0.05);第4周时hAD-PCs组和BMSCs组细胞数略有下降,无基质细胞组细胞全部死亡。hAD-PCs组和BMSCs组细胞计数各时间点差异无统计学意义(P均>0.05)。血细胞标记表达情况:hAD-PCs组和BMSCs组的全血细胞标记CD45+、造血祖细胞标记CD34+CD33-、淋巴细胞标记CD10+/19+和髓系细胞标记CD14+表达在1、2、4周差异均无统计学意义(P均>0.05)。UCB CD34+ HSPCs集落形成结果显示:hAD-PCs组和BMSCs组在1、2、4周形成的集落数量差异均无统计学意义(P均>0.05)。细胞因子分泌情况:hAD-PCs组和BMSCs组IL-3、IL-6、TPO、IFN-γ及TNF-α分泌水平差异均无统计学意义(P均>0.05);hAD-PCs组的SCF在1周时和G-CSF在2周时表达量高于BMSCs组(P=0.008;P=0.002);IL-2在2周时和VEGF、G-CSF和SCF在4周时hAD-PCs组的表达低于BMSCs组(P=0.01;P=0.04;P=0.02;P=0.004)。结论以hAD-PCs作为基质层细胞在细胞形态和增殖能力方面具有与BMSCs相似的对UCB CD34+ HSPCs体外支持作用,hAD-PCs是一种潜在良好体外支持UCB CD34+ HSPCs的基质细胞。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学