基于果蝇S2系统的流感病毒样颗粒的制备及鉴定

作者：林巧; 邹容容; 张国良; 李秀芬; 姚思敏; 刘腊香; 聂广; 周伯平; 刘映霞

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2015, 29(04): 357-360.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2015.04.023

• 果蝇属
• 流感
• 病毒样颗粒
• 细胞系

目的应用果蝇S2表达系统制备流感病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)并鉴定其活性。方法将前期构建的果蝇持续性表达载体pAc-V5-HA、NA、M1与p Coblast共转染至S2细胞,应用杀稻瘟菌素(Blasticindin)结合限制性稀释法筛选共整合流感HA、NA、M1三种基因的单克隆S2细胞株。利用PCR技术鉴定细胞内三种基因整合,Western-Blot技术鉴定细胞上清中VLPs,通过血凝试验评估HA蛋白的凝集效价,通过水解唾液酸的能力评价NA活性。结果应用PCR技术从单克隆S2细胞株基因组中成功扩增流感HA、NA和M1基因;Western-Blot证实细胞上清含有整合HA、NA和M1蛋白的流感VLPs;血凝试验证实流感VLPs能有效凝集鸡红细胞(效价1∶160);NA活性测定发现,流感VLPs能有效水解唾液酸,且呈剂量依赖性,在高剂量(250 ng、500 ng)条件下VLPs和野生型病毒的NA活性相近。结论成功建立整合流感HA、NA、M1基因的单克隆S2细胞株,该细胞可以持续产生流感VLPs,VLPs具有良好的HA和NA活性,可以作为有效的新型流感疫苗。

• 单位
  深圳市宝安区慢性病防治院; 深圳市第三人民医院