绵羊PRNP等位基因PCR-SSCP分析条件的优化

作者：赵春林; 王川; 吴润; 李发弟; 柳纪省

来源：中国兽医科学, 2008, (08): 721-727.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2008.08.016

• 绵羊
• PRNP等位基因
• 聚合酶链式反应-单链构象多态性
• 正交试验
• 分析条件优化 sheep
• PRNP allele
• polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP)
• orthogonal experiment
• optimization of analysis conditions

为进行绵羊PRNP等位基因密码子136、154、171的多态性研究,建立适合于绵羊PRNP等位基因开放阅读框(ORF)内高变区PCR-SSCP分析方法,对凝胶浓度、交联度、甘油浓度、电泳电压、电泳时间、PCR产物与变性缓冲液比例、电泳缓冲液浓度、上样量等影响因素进行了优化试验。在优化中引入了正交试验法,以使优化过程简化,结果可靠。结果表明,交联度49∶1、甘油浓度0%、凝胶浓度12%、电泳电压200 V、PCR产物上样量≥2.0μL且<4.0μL、PCR产物与变性缓冲液比例1∶4、0.5×TBE缓冲液及4℃电泳45 h为最佳试验条件,据此建立了绵羊PRNP等位基因136、154、171密码子的...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 甘肃农业大学