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摘要
目的:构建小鼠编码2型髓样细胞触发受体(TREM2)基因过表达慢病毒载体,并且对其体外表达目的基因的水平进行检测。方法:采用PCR扩增TREM2基因片段,将扩增产物连接至经AgeI酶切后的线性化GV358载体;经PCR方法鉴定及DNA测序比对分析后,将其和包装质粒共转染至293T细胞并用药筛法行滴度测定。然后用重组慢病毒感染293T细胞,观察GFP表达并用实时定量PCR检测TREM2的表达水平。结果:通过PCR成功获得TREM2基因片段并连接到GV358病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定均证实TREM2-GV358携带有正确的TREM2基因;在293T细胞中包装获得病毒并用药筛法测定病毒滴度为2.0×108 TU/mL。感染293T细胞后可观察到大量明显的荧光细胞;实时定量PCR检测结果显示,TREM2过表达慢病毒感染293T细胞后TREM2的表达水平明显增加(P<0.05)。结论:成功构建TREM2-GV358慢病毒载体,为TREM2基因的后期研究提供了实验基础。
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