Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成Ⅰ型胶原的影响

作者：刘曼; 何月; 张吉翔

来源：中国病理生理杂志, 2013, 29(09): 1590-1596.

• 肝纤维化
• 肝星状细胞
• 核因子E2相关因子2
• Ⅰ型胶原
• α-平滑肌肌动蛋白

目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果:(1)荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高(P<0.05)。(2)乙醇刺激组与乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、Ⅰ型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),均明显高于正常对照组(P<0.05),细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高(P<0.05),而乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降(P<0.05),细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降(P<0.05),呈G1/S期阻滞。结论:Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 Ⅰ型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。

• 单位
  南昌大学第二附属医院; 江西省分子重点实验室