来源于人胚纹状体区神经干/祖细胞的培养、冻存及鉴定

作者：高文勇; 姜晓荣; 肖娟; 郗海涛; 陈琳; 黄红云

来源：解剖科学进展, 2015, 21(06): 642-644.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2015.06.022

• 神经干/祖细胞
• 细胞培养
• 免疫荧光细胞
• 超低温储存

目的分离人胚胎纹状体组织的神经干/祖细胞,运用细胞培养上清液作为冻存液和贴壁法培养扩增、合理的冻存密度及有效的复苏时间,在体外建立稳定培养、保存体系,给中枢神经系统疾病的治疗提供技术支持。方法将来源于胚胎的纹状体神经干/祖细胞,利用无血清培养基进行体外培养扩增。采用细胞培养上清液作为冻存液,冻存密度为5×106/ml25×107/ml,分别复苏冻存1、3、6个月的细胞各3支,并用台盼蓝染色计数,计算细胞存活率。将此细胞传代培养p3、p9、p15、p21,用Nestin免疫组化进行化学染色鉴定。结果应用贴壁培养法细胞能够稳定传代p21以上,冻存1、3、6个月后,细胞存活率可达87%左右,仍然保持生长分化能力,Nestin表达阳性率为85%以上。结论本方法培养人胚胎纹状体神经干/祖细胞能传代扩增、低温保存,为中枢神经系统疾病细胞治疗研究提供技术依据。

• 单位
  清华大学玉泉医院; 北京市虹天济神经科学研究院; 首都医科大学; 中国人民武装警察部队总医院