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摘要
目的：基于假病毒技术探究黄芩苷抗HIV-1活性作用。方法：利用HIV-1骨架质粒NL4-3 mCherry Luciferase、HIV-1包膜蛋白质粒pCMV-VSV-G和人胚肾细胞HEK-293T构建HIV-1假病毒药物筛选体系，并对该体系进行优化和安全性验证。测定黄芩苷对293T细胞活性、HIV-1假病毒活性、HIV-1逆转录酶（RT）活性、RNA依赖的DNA聚合酶（RDDP）活性以及核糖核酸酶H（RNase H）活性的影响。将黄芩苷分别与HIV-1 RT的晶体结构（2ZD1）、RNase H的晶体结构（3QIN）进行分子对接，探讨黄芩苷与HIV-1 RT、RNase H的相互作用及结合性能。结果：成功构建出了具有双报告检测基因的HIV-1假病毒药物筛选体系，该体系只有单轮感染活性；黄芩苷对293T细胞活性的抑制作用随浓度的增大而增加，黄芩苷在100 μmol·L-1浓度以下对293T细胞的活力影响较小（P＞0.05）；黄芩苷对HIV-1假病毒具有一定的抑制作用，给药浓度越高，其相应的萤光素酶基因和红色荧光基因表达则越低，在100 μmol·L-1高浓度下其抑制率可达60%左右；黄芩苷对HIV-1 RT活性和RNase H表现出明显的抑制作用（P＜0.05），且呈现浓度依赖性，其半数抑制浓度(IC50)分别约为58.4 μmol·L-1、78.4 μmol·L-1；但黄芩苷对HIV-1 RDDP活性的抑制作用较弱，其IC50约为1.686 mmol·L-1；黄芩苷与HIV-1 RT、RNase H蛋白的结合区域均为对应的酶活区域，其分子对接打分值分别为|-10.991|、|-8.485|；黄芩苷能够与HIV-1 RT酶蛋白的LYS101、ILE180氨基酸残基形成氢键作用，与TRP229氨基酸残基形成π-π作用，与VAL106、TYR181、TYR188、VAL108等氨基酸残基形成多个疏水作用；黄芩苷结构母核上的苯环可以与RNase H酶蛋白中的一个Mn2+形成一个阳离子-π作用，黄芩苷还能与GLY444、ASP498、GLN500、TYR501氨基酸残基形成氢键作用。结论：黄芩苷在体外具有较好的抗HIV-1活性，其主要的作用靶点为HIV-1 RT和HIV-1 RNase H。
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