猪免疫调控分子B7-H4的单克隆抗体制备及其在免疫细胞中的表达分析

作者：郭杰; 刘璐; 朱可蒙; 王宁; 辛九庆; 刘恒贵

来源：中国兽医科学, 2018, 48(05): 545-551.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0097

• 猪B7-H4
• 原核表达
• 单克隆抗体
• 免疫细胞
• 流式细胞检测

B7-H4分子是B7家族的成员之一。在人和小鼠的研究显示,该分子对T细胞免疫学功能的发挥具有重要调节作用。但是该分子在猪免疫系统中的功能还没有报道。本研究通过PCR技术扩增到了猪的免疫调控分子B7-H4(pB7-H4)的基因片段,并将其克隆到pET-32a(+)原核表达载体,获得了pET-32a-pB7-H4。用原核表达并纯化的重组pB7-H4蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选出了1株抗pB7-H4蛋白的单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株3C8,MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为IgG1。流式细胞仪分析结果显示,该MAb能特异性结合细胞系上瞬时表达的pB7-H4。利用该单抗进一步分析pB7-H4在猪外周血T淋巴细胞、巨噬细胞和肺泡巨噬细胞上的表达,结果,pB7-H4在肺泡巨噬细胞和外周血巨噬细胞中高效表达,但是在T淋巴细胞中检测不到明显的表达。上述研究结果表明,该单抗的制备为进一步研究pB7-H4的免疫学功能提供了有效工具。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 哈尔滨师范大学; 兽医生物技术国家重点实验室