HCV NS2对细胞凋亡及DNA损伤应答信号的影响

作者：赵玫; 任来峰; 王艳峰; 杨万霞; 宋静; 陈思思; 任云青; 苏文

来源：中国病原生物学杂志, 2018, 13(01): 34-44.

DOI：10.13350/j.cjpb.180107

• 质粒构建
• 丙型肝炎病毒
• 非结构蛋白2
• 肝细胞肝癌
• DNA损伤

目的构建HCV NS2的真核表达质粒,了解HCV NS2蛋白对细胞凋亡及DNA损伤应答信号的影响。方法以pCMV-tag2B为载体,采用双酶切法构建HCV NS2基因重组载体pCMV-tag2B-NS2,进行酶切分析和DNA测序鉴定;在Huh7细胞中转染相应质粒,分别采用Western blot和DAPI染色分析CPT处理或未处理时NS2对DNA损伤应答信号和凋亡的影响,采用流式细胞术检测NS2蛋白对细胞周期的影响。结果酶切和DNA测序证实pCMVtag2B-NS2重组质粒构建成功,HCV NS2蛋白可在Huh7细胞中正确表达并且活化DNA损伤应答信号,但不影响细胞周期进程;DAPI染色检查,NS2转染组和空载体转染组细胞凋亡率分别为(15.33±0.88)%和(4.66±0.88)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体pCMV-tag2B-NS2,其表达产物HCV NS2蛋白可诱导DNA损伤应答通路的活化并且促进Huh7细胞凋亡。

• 单位
  山西医科大学汾阳学院; 山西省肿瘤医院