紫草素通过Keap1/Nrf2信号通路介导的自噬对卵巢癌SK-OV-3细胞的影响

作者：方堃; 邱芳; 丁娅妮; 邓丹妮; 覃庆锋^*

来源：中药新药与临床药理, 2023, 34(08): 1053-1060.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2023.08.005

• 卵巢癌
• SK-OV-3细胞
• 顺铂
• 紫草素
• Keap1/Nrf2通路
• 自噬

目的 探讨紫草素通过Keap1/Nrf2信号通路介导的自噬对卵巢癌SK-OV-3细胞的影响。方法 采用MTT法检测细胞增殖情况，计算顺铂、紫草素及在紫草素作用下顺铂的半数抑制浓度（IC50），以确定后续干预浓度。采用pcDNA3-EGFP-C4-Nrf2质粒及其阴性对照对SK-OV-3细胞进行转染，分别记为OE-Nrf2组、NC-Nrf2组。将SK-OV-3细胞分为对照组、顺铂（14μmol·L-1）组、顺铂（14μmol·L-1）+紫草素（9μmol·L-1）组，以及将转染后细胞分为顺铂（14μmol·L-1）+紫草素（9μmol·L-1）+NC-Nrf2组、顺铂（14μmol·L-1）+紫草素（9μmol·L-1）+OE-Nrf2组；培养48 h后，采用MTT法检测细胞的增殖抑制情况；RT-qPCR法检测细胞Nrf2mRNA表达情况；Transwell实验检测细胞侵袭能力；AO染色法检测细胞自噬情况；Western Blot法检测细胞增殖、侵袭及自噬相关蛋白（CyclinD1、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin-1、LC3II/I、ULK、Keap1、Nrf2、p62）表达情况。结果 （1）与对照组比较，紫草素4～20μmol·L-1浓度组的SK-OV-3细胞活力明显降低（P<0.05），紫草素对SK-OV-3细胞的IC50为9.04μmol·L-1；单用顺铂10～80μmol·L-1浓度组及紫草素（9μmol·L-1）+顺铂10～80μmol·L-1浓度组的SK-OV-3细胞活力均明显降低（P<0.05）。与单用顺铂组比较，紫草素（9μmol·L-1）+顺铂10～80μmol·L-1浓度组的SK-OV-3细胞活力均明显降低（P<0.05）。单用顺铂对SK-OV-3细胞的IC50为28.49μmol·L-1；与紫草素（9μmol·L-1）联用时，顺铂对SK-OV-3细胞的IC50为14.00μmol·L-1。（2）与NC-Nrf2组比较，OE-Nrf2组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较，顺铂组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；顺铂组、顺铂+紫草素组SK-OV-3细胞的增殖抑制率明显升高（P<0.05）,CyclinD1、PCNA蛋白表达明显下调（P<0.05）；单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；细胞的红色荧光自噬囊泡明显增多，Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与顺铂组比较，顺铂+紫草素组SK-OV-3细胞的Nrf2 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Keap1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；细胞的增殖抑制率明显升高（P<0.05）,CyclinD1、PCNA蛋白表达明显下调（P<0.05）；单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；细胞的红色荧光自噬囊泡减少，Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与顺铂+紫草素+NC-Nrf2组比较，顺铂+紫草素+OE-Nrf2组SK-OV-3细胞的增殖抑制率明显降低（P<0.05）,CyclinD1、PCNA蛋白表达明显上调（P<0.05）；单个视野细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；细胞的红色荧光自噬囊泡增多，Beclin-1、LC3II/I、ULK1、p62蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 紫草素可降低顺铂对卵巢癌SK-OV-3细胞的IC50，提高其对顺铂的敏感性，并抑制其增殖、侵袭能力，可能与其抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬有关。

• 单位
  贵州省人民医院