多房棘球蚴RNA结合蛋白EWS的原核表达及其细胞定位与功能的初步鉴定

作者：严玉婷; 郭小腊; 孙玥; 何学东; 丁军涛^*; 郑亚东^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(12): 29-35.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.12.017

• 多房棘球蚴
• RNA结合蛋白EWS基因
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 免疫荧光

通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白EWS(EmEWS)基因的原核表达、抗体制备、细胞定位等研究，初步探究EmEWS基因特征以及与RNA的结合能力。根据Wormbase数据库中EmEWS基因序列设计引物，利用RT-PCR扩增EmEWS基因并构建重组表达质粒，诱导表达、纯化重组蛋白，制备EmEWS多克隆抗体后进行Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光定位、双荧光测定。结果表明，EmEWS基因长度为1 485 bp,编码495个氨基酸，在多房棘球蚴原代细胞中表达量较高，在原头蚴中最低。生物信息学分析表明，细粒棘球蚴EWS与EmEWS相似性高达98.3%,且EmEWS的RBD结构域在绦虫中高度保守。EmEWS重组蛋白大小约为54 ku,制备的多克隆抗体可识别多房棘球绦虫中天然EmEWS蛋白。细胞定位显示EmEWS主要分布在细胞膜上。双荧光试验证明EmEWS可以与结合富含UG的RNA序列结合。综合上述结果，推测EmEWS可能作为转录调控因子参与小RNA的形成，同时有助于核蛋白的运输。

• 单位
  浙江农林大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 动物科技学院