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摘要
目的探讨白血病抑制因子(LIF)抑制缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠中神经元凋亡及神经炎症的分子机制。方法将7日龄SPF级Sprague-Dawley(SD)新生大鼠分为4组(n=15):假手术组、HIE组、HIE+LV-NC组和HIE+LV-LIF组。通过结扎新生大鼠的右侧颈总动脉建立HIE模型。假手术组大鼠进行相同的手术操作但不结扎右侧颈总动脉。HIE+LVLIF组和HIE+LV-NC组在HIE建模前7 d,分别对新生大鼠脑室注射过表达LIF的慢病毒(LV-LIF)或对照慢病毒(LV-NC)。LV-LIF或LV-NC给药及HIE建模后,采用2%2,3,5-三苯基四氮唑氯(TTC)染色检测梗死体积,根据Longa评分进行神经行为评估,通过尼氏染色和TUNEL染色观察脑组织形态和神经元凋亡。通过RT-PCR或Western blot检测缺血半影区内LIF、NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB p65和IκBα的表达。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。通过免疫荧光检测脑组织中活化的小胶质细胞标志物Iba-1的表达。结果与假手术组相比,HIE组LIF mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P <0.05)。与HIE组和HIE+LVNC组相比,HIE+LV-LIF组LIF mRNA和蛋白表达水平均升高(P <0.05),神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡指数均显著降低(P <0.05)。与HIE组和HIE+LV-NC组相比,HIE+LV-LIF组脑组织匀浆中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平均降低(P <0.05)。与HIE组和HIE+LV-NC组相比,HIE+LV-LIF组脑组织中Iba-1的相对荧光强度显著降低(P <0.05)。与HIE组和HIE+LV-NC组相比,HIE+LV-LIF组大鼠脑缺血半影区内NLRP3、ASC、Caspase-1和NF-κB p65的蛋白表达水平均降低,IκBα蛋白表达水平升高(P <0.05)。结论 LIF可通过抑制NLRP3炎症体和NF-κB信号通路的激活来有效抑制缺氧缺血性脑病后的小胶质细胞活化和神经炎症。
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单位西京医院; 西安医学院; 中国人民解放军空军军医大学
