二型谷氨酸羧肽酶稳定表达细胞株的建立

作者：田士强; 王任直; 李桂林; 王欣; 张波; 姚勇; 窦万臣; 孔燕国

来源：基础医学与临床, 2004, (03): 331-334.

• 二型谷氨酸羧肽酶
• 表达载体
• 稳定表达细胞株

为了深入研究二型谷氨酸羧肽酶 (glutamatecarboxypeptidaseⅡ ,GCPⅡ )功能和了解其在兴奋性氨基酸代谢过程中作用 ,拟构建GCPⅡ的表达载体 ,建立稳定表达细胞株 ;采用聚合酶链反应 ,酶切连接 ,和蓝白筛选的方法 ,构建表达载体 ;磷酸钙共沉淀的方法转染HEK2 93细胞 ,G4 18筛选阳性细胞克隆 ;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株。采用PCR方法扩增出GCPⅡ ;构建含有GCPⅡ基因的表达载体———pcDNA3 1 NA ;建立了细胞株HEK 2 93 NA。成功构建了GCPⅡ的表达载体 ,建立了稳定表达细胞株 ,为深入研究该酶的功能和兴奋性氨基酸毒性作用奠定了基础。

• 单位
  北京协和医院; 中国医学科学院; 中国协和医科大学