草菇子实体蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

作者：李治平; 陈明杰; 王耀冉; 宋盼盼; 常婷婷; 黄波; 赵妍^*

来源：食用菌学报, 2021, 28(06): 24-30.

DOI：10.16488/j.cnki.1005-9873.2021.06.004

• 草菇
• 蛋白酶
• 分离
• 纯化

将草菇(Volvariella volvacea)子实体在15℃放置36 h,按照液料比10∶1加蒸馏水提取粗蛋白酶液,经硫酸铵沉淀、DEAE FF离子层析柱和Superdex 75 Increase 10/300凝胶柱分离纯化,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定该蛋白酶纯度和相对分子质量,并确定最适反应pH、最适温度和反应动力学常数,并探讨了不同金属离子和化学试剂对该蛋白酶活性的影响。结果表明:纯化后电泳纯蛋白酶D2-S4相对分子质量约为20000,最适pH为7.0,最适反应温度为40℃,米氏常数Km为1.68 g·L-1,Vm为3.11μg·(mL·min)-1;与对照组相比,除Ca2+处理外,其他处理均对该蛋白酶的活性影响存在显著性差异,其中Fe2+对该蛋白酶活性有增强作用,该蛋白酶对苯甲基黄酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride, PMSF)敏感,是一种丝氨酸蛋白酶,且β-巯基乙醇对其抑制效果明显;阳离子洗涤剂十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)和曲拉通X-100对该蛋白酶活性均有抑制,而离散型洗涤剂吐温-80对该蛋白酶有增强作用。

• 单位
  上海市农业科学院食用菌研究所; 上海海洋大学