P物质活化NK92-MI细胞脱颗粒及差异circRNA表达的研究

作者：张亚南; 侯殿东; 傅炜昕; 刘国栋; 范世光; 赵蔓嘉; 梁再赋^*

来源：国际免疫学杂志, 2022, 45(03): 234-241.

• 神经肽SP
• NK92-MI细胞
• 环状RNA
• microRNA

目的探讨神经肽P物质(substance P, SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用, 分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist, NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR, qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应, 流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达, 高通量测序技术分析circRNA表达谱, qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA, miRNA), 并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果刺激12 h后, SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍, 刺激24 h后, 穿孔素mRNA表达继续升高, 约为对照组3.65倍, 差异均具有统计学意义(t值分别为4.00、4.72, P值均<0.05);在12 h时, NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组, 差异具有统计学意义(t=2.39, P<0.05), 但在24 h时, 与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比, K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%, (17.78±1.94)%, (10.19±2.04)%], t值分别为6.27、12.19、7.83, P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs:circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测, circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关(r值分别为-0.57、-0.74, P值均<0.05)。结论 SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞, 下调circZNF609和circAMBRA1的表达, 上调穿孔素mRNA的表达, 促进NK92-MI细胞脱颗粒增强其杀伤功能。

• 单位
  湖州师范学院; 天津医科大学; 中国医科大学