TRPM2基因敲除小鼠的建立与鉴定

作者：王存连; 李龙飞; 张瑞华; **举; 徐彤^*

来源：生物学杂志, 2023, 40(04): 114-118.

• CRISPR/Cas9
• TRPM2
• 基因敲除
• 小鼠

利用CRISPR/Cas9技术构建瞬时受体电位M2(TRPM2)基因敲除的杂合子小鼠模型。参考Ensembl数据库中Trpm2-203的内含子2和内含子24序列选择sgRNA靶点并进行体外合成。通过体外转录方式获得Cas9 mRNA,将其与sgRNA显微注射至C57BL/6J小鼠的受精卵后，移植到假孕母鼠的输卵管内，获得F0代小鼠。阳性F0代小鼠分别与野生型C57BL/6J小鼠交配获得F1代。结果显示，经PCR产物测序共获得3只阳性F0代小鼠；阳性F0代小鼠分别与野生型C57BL/6J小鼠交配获得4个品系，共获得27只阳性F1代小鼠。通过实时荧光定量PCR和Western Blot方法验证，表明研究成功构建TRPM2基因敲除杂合子小鼠(TRPM2+/-),为下一步开展TRPM2基因及其表达产物的生物功能研究提供良好的动物模型。

• 单位
  河北北方学院; 动物科技学院