大鼠GAD65重组腺病毒载体的构建和鉴定

作者：陈盛强; 刘启才; 陈德忠; 林勇平; 孙卫文; 廖卫平

来源：解剖学研究, 2007, (03): 163-167.

• 腺病毒
• DNA重组
• 谷氨酸脱羧酶65
• 载体 Adenovirus
• DNA recombination
• Glutamic acid decarboxylase 65
• Vector

目的构建大鼠GAD65重组腺病毒载体。方法将目的基因大鼠GAD65 cDNA亚克隆到穿梭质粒pShutile启动子CMV的下游,再通过I-CeuⅠ和PI-SceⅠ两个稀有酶切位点,将目的基因GAD65与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因GAD65重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶PaeⅠ切割后,两端露出反向末端重复序列(rTR),利用脂质体转染293细胞,获得含目的基因重组腺病毒上清。PCR双引物检测含有目的基因GAD65的片段。结果在挑选的5个空斑中,有4个含GAD65 cDNA阳性重组腺病毒。GAD65重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞内进行有效的...

• 单位
  广州医科大学