禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化

作者：杨金国; 王聃; 刘慧芳; 杜艳芬; 司微; 赵海玲; 林靖凯; 王春来; 倪红波; 赫明雷; 彭玮; 赵福广; 刘思国

来源：中国动物传染病学报, 2009, (02): 59-62.

• 禽分枝杆菌副结核亚种
• 22KD基因
• ag85B基因
• 重叠延伸剪接技术
• 重组表达 Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis
• 22KD gene
• ag85B gene
• splicing by overlapping extension(SOE)
• recombinant expression

为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 生命科学学院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 延边大学; 吉林农业大学