弓形虫分泌蛋白ROP5的全基因原核重组表达与抗原性鉴定

作者：薛峰; 黄敏君; 洪彩玲; 杨英超; 甘绍伯; 谷俊朝

来源：中国热带医学, 2014, 14(03): 259-263.

DOI：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2014.03.007

• 刚地弓形虫
• 棒状体蛋白ROP5
• 原核重组表达
• 抗原性

目的在大肠杆菌工程菌中重组表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白5(ROP5)的融合蛋白GST-6×His-ROP5,并初步评价重组蛋白的抗原性。方法体外细胞培养弓形虫速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP5基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,最后通过Western blotting鉴定重组蛋白rROP5的抗原性。结果构建了弓形虫ROP5全基因重组表达质粒,诱导表达了GST-6×His-ROP5融合蛋白,分子量为96 kDa,与预测结果相符,重组蛋白与人源抗血清有显著免疫印迹反应。结论本研究获得了弓形虫ROP5全长重组蛋白,为进一步改进弓形虫诊断抗原,研究蛋白结构以及分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 首都医科大学附属北京友谊医院; 北京热带医学研究所